LES GERMES OPPORTUNISTES DANS LES SELLES

INTRODUCTION

Les germes opportunistes dans les selles font référence aux bactéries, virus, parasites ou champignons qui peuvent être présents dans les selles d'une personne en bonne santé, mais qui peuvent causer des infections chez des individus immunodéprimés ou vulnérables. Cet opportunisme est très souvent responsable de la plupart des maladies et des décès chez les patients atteints du VIH. Très souvent dans les selles de patients immunodéprimés, des germes dits << opportunistes >> peuvent faire l’objet d’une recherche.

Ils  peuvent inclure des virus tels que le norovirus, le rotavirus mais en grande partie des parasites tels que cryptosporidium, microsporidium, Isospora, Cyclospora qui nécessitent des colorations spécifiques sur les selles pour être observées. Ils sont transmis par contact direct avec les selles contaminées, par ingestion d'eau ou d'aliments contaminés, ou par contact avec des surfaces contaminées et peuvent causer des infections gastro-intestinales, telles que la diarrhée, la gastro-entérite ou la colite, chez les personnes dont le système immunitaire est affaibli.

I- INTERET CLINIQUE

La recherche des germes opportunistes survient en cas de diarrhées aiguës chez les patients immunodeprimés (CD4 < 100/mm3) ou chez des personnes atteintes de maladies chroniques  notamment dès  lors qu’elles durent plus de 3 à 4 jours, avec une émission de plus de trois selles de consistance très molle à liquide par jour et/ou qu’elles s’accompagnent de sang et de glaires.

II- RECHERCHE PROPREMENT DITE

A. CAS DES VIRUS

Leur détection repose sur la suspicion clinique, sur des tests PCR d’un panel multiplex et sur des techniques d’amplification des acides nucléiques (TAAN).

B. CAS DES PARASITES

1. Coloration de Ziehl-Neelsen modifiée

Elle s’effectue pour la recherche d’oocystes de Cryptosporidium parvum. Cette modification de la coloration de Ziehl-Neelsen permet la détection des micro-organismes semi-acido-resistants. En effet, ils sont colorés en rose peu intense par la Fuschine et retiennent ce colorant après décoloration par l’acide et l’alcool.

• Matériels et produits nécessaires

Bec bunsen, platine chauffante,méthanol, acide sulfurique à 1%, alcool à 90°, Fuschine, Bleu de méthylène, lames, microscope.

• Réalisation
• Sécher le frottis à l'air.
• Fixer au méthanol pur pendant 5 minutes
• Sécher de nouveau.
• Colorer la lame dans un bain de fuchsine phéniquée :1 heure.
• Rincer à l'eau puis différencier dans de l'acide sulfurique à 2 % pendant 20
• secondes en agitant la lame.
• Rincer à l'eau puis colorer dans une solution de vert malachite à 5 % pendant 5
• minutes ou dans une solution de bleu de méthylène à 3 %.
• Rincer à l'eau et sécher à l'air.

• Résultats

Les cryptosporidies apparaissent en rouge sur fond bleu et sont donc faciles à repérer à l'objectif x 40 et à diagnostiquer à l'immersion (objectif x 100).

Oocystes de Cryptosporidium parvum

D'autres techniques proposées ont une valeur certaine (colorations à l'auramine, par anticorps monoclonal fluorescent,...) mais elles nécessitent l'emploi d'un

microscope à fluorescence, sont souvent chères et ne sont pas d'un emploi facile pour tout laboratoire et à toute heure. La coloration par les solutions de May-Grünwald et de Giemsa ne nous semble pas de lecture aisée.

2. Coloration au Trichome

Les spores de microsporidies, visibles après une coloration générale aux solutions de May-Grünwald et Giemsa, sont plus facilement mises en évidence par

la technique de coloration au trichrome :

• Matériels et produits nécessaires

Lames, formol 10%, méthanol, chromotrope 2R, acide acétique, alcool à 90° microscope

• Réalisation

-Formuler la selle dans une solution de formol à 10%.

- Effectuer un frottis de la selle.

- Fixer le frottis pendant 5 minutes dans un bain de méthanol.

- Plonger dans la solution de chromotrope 2R, 90 minutes.

- Rincer deux fois :

* à l'eau du robinet d'abord ;

* en solution acide-alcool ensuite :

- acide acétique : 4,5 ml

- alcool à 90 % : 995,5 ml

Les spores, recherchées à l'objectif xlOO, apparaissent en rouge

• Résultats

Les spores de microsporidies apparaissent rondes, mesurant 1-5µm avec une coloration rose bipolaire sur fond bleu.

3. Coloration de kinyoun

Elle permet de détecter les Mycobactérie spp. et d'autres parasites, c'est-à-dire Cryptosporidium et Isopora spp.

• Matériels et produits utilisés

Lames, Kinyoun carbol fuschin stain, bleu de méthylène, alcool, vert brillant, microscope.

• Réalisation
• Tout d'abord, préparez le frottis sur lame.
• Inonder la lame de colorant primaire, Kinyoun Carbol Fuchsin Stain, et attendre 2 minutes.
• Rincer la lame avec de l'eau.
• Inonder la lame avec de l’alcool, jusqu'à ce qu'il n'y ait plus de couleur qui s'écoule de la lame (environ 3 à 5 secondes).
• Laver à nouveau la lame avec de l'eau.
• Inonder la lame de contre-colorant, de bleu de méthylène ou de vert brillant. Attendez 30 secondes.
• Rincer la lame avec de l'eau.
• Séchez la lame à l'air libre.
• Maintenant, la lame est prête à être observée au microscope.

• Résultats

Notons qu’en ce qui concerne Isospora, il peut être observé à l’état frais ainsi qu’après une coloration de Ziehl-Neelsen modifiée.

ISOSPORA

Mycobactéries vues par la coloration de Kinyoun

Cryptosporidium vus par la coloration de Kinyoun

CONCLUSION

Les germes opportunistes dans les selles sont des complications majeures du SIDA. Leur connaissance doit être approfondie pour une meilleure prise en charge des patients. Leur recherche quant à elle s’effectue par le biais de diverses techniques et leur présence ne signifie pas nécessairement qu’une infection est présente car ils peuvent se retrouver chez une personne en bonne santé sans causer de problèmes. D’autres tests cliniques et une évaluation médicale approfondie sont souvent nécessaires pour confirmer le diagnostic.