ÉLECTROPHORÈSE DE HÉMOGLOBINE

L'électrophorèse de l'hémoglobine est une technique utilisée en biologie pour détecter des malformations de l'hémoglobine.

DÉFINITION

Une électrophorèse est un procédé qui vise à séparer différentes particules en fonction de leur charge électrique, de leur taille et de leur forme.

Cette séparation se fait grâce à un champ électrique généré par des électrodes, mises au contact de la solution à étudier.

Une électrophorèse de l’hémoglobine se pratique à partir d'un échantillon sanguin et permettra de séparer les différents types d'hémoglobine contenus dans le sang.

En effet, l'hémoglobine sanguine existe sous diverses variétés, essentiellement l'A1 représentant habituellement 98% de l'hémoglobine chez l'adulte, et l'A2. Mais il reste généralement une quantité d'hémoglobine fœtale chez l'adulte

Les anomalies de l’hémoglobine

Les anomalies de l’hémoglobine sont des pathologies génétiquement déterminées qui constituent, pour un certain nombre d’entre elles, un problème de santé publique dans de vastes parties du monde. Ces anomalies se répartissent en deux grands groupes :

- les anomalies de structure des chaînes protéiques de
globine, comme les hémoglobines S, C et E

- les anomalies de synthèse des chaînes de globine,
responsables des thalassémies et des persistances
héréditaires de l’hémoglobine fœtale (PHHF). L’hémoglobinopathie la plus fréquente et la plus grave
est la drépanocytose.

Pourquoi faire un examen d'électrophorèse avant le mariage ?

L’anémie SS est une maladie génétique. Elle est transmisse à l’enfant par deux conjoints AS, homme et femme. L’unique moyen d’éviter de mettre au monde des enfants SS c’est d’éviter une procréation entre deux personnes AS.

Comment le savoir ? Il faut procéder à un examen d’électrophorèse.

La drépanocytose

La drépanocytose est une affection génétique due à une mutation ponctuelle dans le gène beta-globine situé sur le chromosome 11. Elle est caractérisée par la substitution de l’acide glutamique, en position 6 de la structure primaire, par une valine.

Il en résulte une hémoglobine anormale (HbS), qui a tendance à entrainer une diminution de solubilité dans certaines circonstances comme l'hypoxie, l'acidose, la déshydratation. l'HbS se polymérise entraînant une déformation des hématies en "faucille" d'où le nom de la maladie, encore appelée "anémie falciforme".

Globules rouges normaux                                                                                                                 Globules rouges drépanocytaires

La déformation des globules rouges a deux conséquences directes principales et une conséquence indirecte :

• Premièrement, une destruction anormalement rapide des globules rouges (dont la durée de vie est ainsi très diminuée), responsable d’un manque de globules rouges, ou anémie.
• Deuxièmement, une obstruction des petits vaisseaux sanguins car ces globules rouges déformés ont plus de mal à se faufiler dans des très petits vaisseaux, et vont donc obstruer ces vaisseaux dans des circonstances favorisantes, comme la déshydratation, le froid ou le manque d’oxygène. Cette obstruction des vaisseaux va se manifester par des douleurs dans l’organe où elle survient. Il s’agit le plus souvent de douleurs osseuses ou abdominales. C’est la crise drépanocytaire, ou crise vaso-occlusive.
• La troisième manifestation de la maladie est une sensibilité anormalement élevée à certains microbes, surtout le pneumocoque, qui peut être responsable d’infections très graves.

Conditions de Prélèvement

Le prélèvement doit être effectué dans un tube EDTA, Eviron 4 mL de sang et réfrigéré. Le délai entre la date de prélèvement et la date de réalisation de l'analyse ne doit pas dépasser 7 jours.

PROTOCOLE

• Mettre à tremper les bandes d’acétate de cellulose dans le tampon d’électrophorèse (tampon tris-véronal) pendant 10 à 20 minutes.
• Essorer l’excès de tampon en plaçant les bandes entre deux feuilles de papier absorbant essuie-tout.

• Placer la bande sur le portoir en veillant à disposer la face absorbante vers le haut. La bande doit être tendue et ses extrémités doivent dépasser suffisamment pour tremper dans le tampon une fois le support placé dans la cuve.

NB : Le dispositif de fixation de la bande sur le support varie selon les fabricants.

• Remplir les deux compartiments de la cuve avec un même volume de tampon d’électrophorèse.
• Mettre en place le(s) support(s) dans la cuve

• Prélever un échantillon préalablement dilué au 1/4 et le déposer sur la bande, déjà en place sur son support, au tiers de l’extrémité, côté cathode (borne noire) en prenant garde que la bande soit bien horizontale et que l’échantillon ne coule pas.
• Peut prélever et déposer les échantillons soit avec une micropipette, soit avec un capillaire, soit avec un applicateur comme celui présenté ci-dessous, réalisé avec un bouchon et deux trombones pour permettre un dépôt linéaire, en laissant un espace suffisant pour ne pas risquer la fusion des échantillons qui diffusent légèrement lors du dépôt.
• Recommencer pour chaque échantillon, bien nettoyer l’applicateur entre chaque dépôt.
•          Fermer la cuve, mettre sous tension et faire migrer environ 1 h sous 150 V
• Après migration, placer les bandes dans la solution de rouge ponceau pendant 10 minutes.
• Décolorer le fond rouge des bandes en les trempant dans deux bains successifs d’acide acétique à 5 % pendant 2 minutes. Agiter le cas échéant pour accélérer la décoloration.
• La décoloration progressive du fond des bandes d'acétate permet l'apparition des échantillons d'hémoglobine colorés en rouge ponceau.
• Ensuite passer à l’étape de la transpiration qui tend a rendre la bande transparente.
•      Après l’étape de la transparisation placer la bande acétate sur une lame prévue à cet effet et laisser sécher le tout à l’étuve pendant 15 minutes à 90 degré.
• Pour le traçage des courbes d’élèctrophorèses, nous utilisons un appareil appelé le SCANION sur lequel nous posons la lame portant la bande acétate.
• Après lecture l’appareil nous donne les différents pourcentages et la courbe est transmise au logiciel VSGE qui matérialise la courbe.
  

  Résultats

  L’hémoglobine S, est moins chargée électriquement que l’hémoglobine A (en raison de la substitution d’un acide glutamique par une valine en position 6 de la chaîne de la bêta-globine), donc migre moins loin que l’hémoglobine A et peut ainsi être distinguée de celle-ci sur la bande d’acétate de cellulose.

RECOMMANDATION

• Au LAMA l’examen d’élèctrophorèse de l’hémoglobine se fait avec précaution et précision.
• Le technicien doit être assez concentré pour éviter les erreurs , bien vérifier sa liste de travail et contrôler les différentes positions des tubes et les numérotés.
• Lorsque nous avons des résultats d’hémoglobines autres que la normale, un contrôle est systématiquement fais avant le rendu des résultats